Лаборатория гриппозных вакцин

Заведующая лабораторией — д. м. н. Цыбалова Людмила Марковна

Телефон: +7 (812) 234–62–61

E-mail: sovet@influenza.spb.ru

Лаборатория организована в 2007 году. Деятельность лаборатории направлена на разработку и экспериментальное изучение безвредности, иммуногенных свойств и эффективности препаратов для иммунопрофилактики вирусных инфекций.

Основные направления деятельности лаборатории

В настоящее время усилия сотрудников лаборатории сконцентрированы на 2-х задачах:

• Создание рекомбинантной гриппозной вакцины на основе консервативных белков вируса гриппа. (Проводятся исследования на лабораторных животных иммуногенной и протективной активности нескольких вариантов рекомбинантной гриппозной вакцины, включающей наружный домен белка M2 вируса гриппа, представленном на разных носителях: коровом антигене вируса гепатита B (HBc), вирусе мозаики коровьего гороха (CPMV), вирусе мозаичной болезни табака. Гибридные белки получены в Научном центре РАН «Биоинженерия» (рук. акад. РАН К. Г. Скрябин), на факультете биологии МГУ им. М. В. Ломоносова (рук. работ — акад. РАН И. Г. Атабеков))
• Биологическая и молекулярно-генетическая характеристика нового штамма вируса гриппа A — универсального донора внутренних генов для вакцинных и производственных штаммов

Лаборатория является одним из основных исполнителей комплексной бюджетной темы НИР: «Противогриппозные вакцины широкого спектра действия: разработка, опытное производство, апробация» (2011–2014 гг.).

• В 2010 году в лаборатории начаты исследования в соответствии с Государственным контрактом №02.740.11.0877 от 28 июня 2010г. Министерства образования и науки Российской Федерации по теме «Разработка рекомбинантной противогриппозной вакцины на основе высоко консервативных вирусных белков»
• С 2008 года в лаборатории проводятся исследования в соответствии с Государственным контрактом №02.527.11.002 от 24 июня 2008 г. Федерального агентства по науке и инновациям и центра «Биоинженерия» РАН, шифр 2008-0-2.7-09-01 по теме “Продукция вакцинных белков в растениях” в рамках Европейского проекта №227056 «Plant-produced Vaccines» FP7-KBBE-2008-2B.
• Осуществляются исследования в рамках международного проекта с республикой Казахстан «Грипп лошадей: эпизоотический мониторинг, разработка средств специфической профилактики и диагностики» 2010–2012 гг.

Методы исследования

Для получения вакцинных штаммов используются методы как классической реассортации, так и обратной генетики.

Морфологическое исследование иммунобиологических препаратов проводится методами электронной микроскопии.

Иммуногенные свойства препаратов исследуются с применением широкого спектра иммунологических, вирусологических и морфологических методов (ИФА, РТГА, реакция микронейтрализации, вестерн-иммуноблоттинг, проточная цитофлюориметрия и др.). Изучается специфический системный (сывороточные антитела изотипов IgM, IgA, IgG), местный (секреторный IgA), клеточный (фенотипирование Т-лимфоцитов, маркеры клеточной активации, центральные и эффекторные клетки памяти, Тх1 и Тх2 типа, продукция внутриклеточных цитокинов) иммунный ответ после иммунизации лабораторных животных вакцинными препаратами в зависимости от дозы, схемы иммунизации, пути введения.

Протективная активность иммунобиологических препаратов различного происхождения проводится на тканевых культурах, развивающихся куриных эмбрионах и лабораторных животных. В работе используются вирусы гриппа человека и птиц, парагриппа, аденовирусы и другие респираторные вирусы. В отношении гепатита В, С и коронавирусной инфекции человека используются модельные вирусы этих инфекций — вирус гепатита уток (для гепатита B), вирус диареи телят (для гепатита C) и вирус инфекционного бронхита кур (для коронавирусной инфекции человека).

Учебная деятельность

На базе лаборатории проводятся консультации и практическое обучение (стажировка) научных сотрудников и специалистов методам получения вакцинных штаммов и характеристике вакцинных препаратов.

В лаборатории имеются все условия для прохождения бакалаврских и магистерских работ.

Межинститутские и международные научные связи в рамках грантов, проектов, программ

• Центр «Биоинженерия» РАН.
• МГУ им. М. В. Ломоносова.
• НИИ экспериментальной медицины РАМН.
• ФГУ научно-исследовательский ветеринарный институт птицеводства РАСХН.
• Avir Green Hills Biotechnology Research Development Trade AG (Австрия, Вена).
• Jonn Innes Centre Norwich, UK (Великобритания, Норидж).
• Национальный центр биотехнологий Республики Казахстан.

Основные достижения

• Проведены испытания на лабораторных животных токсичности, иммуногенности и протективной активности нескольких вариантов рекомбинантных гриппозных белков, включающих наружный домен M2-белка вируса гриппа птиц. Показана эффективность препаратов и целесообразность их дальнейшей разработки.
• Охарактеризованы биологические и молекулярно-генетические свойства нового универсального донора внутренних генов для вакцинных штаммов. Донор обладает высокой репродуктивностью, не уступающей используемому в настоящее время донору A/PR/8/34, и полной аттенуацией к человеку, что позволит его использовать для создания вацинных штаммов как для инактивированной, так и для живой гриппозных вакцин.
• На основе универсального донора А/Гонконг/1/68/162/35 ХА (H3N2) получены реассортанты с вирусами гриппа типа А/H5N1, A/H3N8, A/H3N2, A/H1N1. Доказана передача реассортантам полезных свойств вируса–донора – высокая репродуктивность и признаки аттенуации — температурочувствительность и холодоадаптированность.
• Разработан производственный штамм A/8Perth/16/09 (H3N2), обладающий высокой репродуктивностью, безвредностью, генетической стабильностью. Комиссией по вакцинным штаммам при Минздравсоцразвития РФ данный штамм был рекомендован для производства трехвалентной вакцины на сезоны 2010–2011 и 2011–2012гг. Подана заявка на получение патента (рег.№ 2010130332).
• Получены антигенные реассортанты для типирования нейраминидазы и гемагглютинина современных и реликтовых штаммов вирусов гриппа типа А человека, животных и птиц, начиная с 1946 года.
• Проведена экспериментальная оценка эффективности системы фотодинамической инактивации вирусов «Theraflex — MB Plasma» (Франция) в свежезамороженной плазме донорской крови на модели ряда ДНК- и РНК-содержащих вирусов.
• Подготовлены и прошли экспертизу в ГИСК им. Л. А. Тарасевича пакет документов: Пояснительная записка; Фармакопейная статья; Паспорт главного клеточного банка Vero; Дополнительный материал к процессу производства, а также оформлены Паспорта 3-х опытных серий и полуфабриката живой гриппозной вакцины нереплицируемой (ЖГВ НР). 
• В рамках совместного проекта с Национальным центром биотехнологии республики Казахстан получены экспериментальные серии инактивированной цельновирионной гриппозной вакцины против вируса гриппа A/H5N1, подготовлен проект документации (ФСП, Регламент производства, инструкция по применению).

Оснащение лаборатории

Лаборатория оснащена современным оборудованием:

• проточный цитофлюориметр BD FACSCanto II
• фотометр для планшет (BioRad)
• СО2 инкубатор, трансиллюминатор
• камеры для вертикального и горизонтального электрофореза
• ламинарный бокс MSC.12
• спектрофотометр СФ 56
• аналитические весы АВ 120-01С
• инвертированный микроскоп Biolam P2-1
• приборы для ультрафиолетового обеззараживания воздуха, электростатический очиститель воздуха, система для ультрафильтрации воды, термостаты, центрифуги, холодильные установки, морозильные камеры.

Избранные публикации

• «Вопросы общей вирусологии»
  Под ред. академика О. И. Киселева и д. б. н. И. Н. Жилинской
  2007. Санкт-Петербург. 374 с.
• «Применение гриппозных вакцин в периоды угрозы и развития пандемии»
  О. К. Кузнецов
  «Эпидемиология и вакцинопрофилактика», 2007,№ 1, с. 31-37, №2,с. 39–43.
• «Состояние разработки вакцин против вируса гриппа Н5N1 в мире и в России»
  О. И. Киселев, Л. М. Цыбалова
  «Грипп птиц: происхождение инфекционных биокатастроф». Спб, 2007., с. 175–181.
• «Проблемы и перспективы вакцинопрофилактики гриппа в период пандемии»
  Л. М. Цыбалова, О. И. Киселев
  Ж. «Эпидемиология и вакцинопрофилактика». 2007, № 6 (37). с. 39–47.
• «Эпидемический процесс при краснухе в условиях массовой иммунизации детей»
  Л. М. Цыбалова, Е. В. Тимофеева, Ж. В. Бузицкая, Т. М. Гудкова, В. Л. Максакова, О. В. Парков
  ЖМЭИ № 5, 2009,с.47-51.
• «Химерные частицы вируса мозаики коровьего гороха, несущие внеклеточный домен М2-белка вируса гриппа типа А: получение и характеристика»
  Ю. А. Мещерякова, М. А. Эльдаров, А. И. Мигунов, Л. А. Степанова, И. А. Репко, О. И. Киселев, Д. П. Ломоносов, К. Г. Скрябин
  «Молекулярная биология», т.43, № 4, 2009,с.741-750.
• «Продолжительность защиты от гриппа после инфицирования и вакцинации»
  О. К. Кузнецов, Л. А. Степанова.
  Журнал «Эпидемиология и вакцинопрофилактика». № 3,2009,с. 5–11.
• «Разработка рекомбинантной вакцины против гриппа A(H1N1) 2009 на основе вирусоподобных наночастиц — носителей внеклеточного домена М2 белка»
  Р. Ю. Котляров, В. В. Куприянов, А. И. Мигунов, Л. А. Степанова, Л. М. Цыбалова, О. И. Киселев, Н. В. Равин, К. Г. Скрябин.
  Acta Naturae. 2010 Т.2, №2(5), с.75-80.
• «Длительность активно приобретенной защиты от гриппа»
  О. К. Кузнецов, Л. А. Степанова, Е. Г. Головачёва, О. В. Гашинская
  Мед. акад. журн. 2010. Т.10. №1. С.15-26.
• «Эпидемия гриппа А(H1N1)v в России»
  Л. М. Цыбалова, Л. С. Карпова, А. Б.Комиссаров, М. Ю. Еропкин, М. П. Грудинин, О. И. Киселев.
  Вестник РАМН, 2011г. № 2 (в печати).